分析型超速离心实验

沉降速率(SV)

SV 是一种时间依赖性技术,其中感兴趣的颗粒在整个实验过程中沉淀,最终沉降到样品池底部。

在 SV 实验中,在样品池中放置一个最初均匀的溶液,并使用足够高的转速导致溶质相对快速地沉积到样品池底部。这会产生弯液面附近的溶质浓度降低,并在弯液面与溶质浓度达到均一之间形成清晰的边界。

虽然单个粒子的速度无法求出,但可以测量出该边界的移动速率。由此可以确定样品的沉降系数,s,它与样品的质量相关,同时与摩擦系数的倒数成正比,而摩擦系数反应了样品的形状。这可以由等式表示:

Sedimentation Velocity Image AUC Formula

SV 通常被认为是 大多数目前 AUC 应用的首选方法,包括蛋白质自聚集和与其它蛋白质作用的研究、膜蛋白的研究以及生物技术中的应用。1

 

沉降平衡 (SE)

这是一种不需要依赖时间的 AUC 技术,其中样品颗粒在离心样品池中达到平衡状态,并且不会沉淀。

在 SE 实验中,少量最初均匀的溶液以低于 SV 实验所需的低转速进行离心。当溶质开始向细胞底部沉淀,底部浓度增加时,扩散过程与沉积过程相逆。 Sedimentation Equilibrium Image AUC Formula

最终,两个对立的过程接近平衡,溶质的浓度呈指数级向细胞底部增加。在平衡时,产生的溶质分布随时间保持不变。测量不同点的浓度可以确定沉积溶质的摩尔重量(数值等于分子量)。了解更多

 

使用感言:

“由于样品较大且存在构象上的异质性,分析型超速离心机的沉降速率实验使我们能够对染色质凝聚机制做出许多开创性的发现,而这些发现在使用任何其他技术时是不可能完成的。”

Jeffrey C. Hansen, Ph.D. 
Colorado State University 

 

参考文献:

Zhao H, Brautigam CA, Ghirlando R, et al. Current Methods in Sedimentation Velocity and Sedimentation
Equilibrium Analytical Ultracentrifugation. Curr Protoc Protein Sci 2013;20:2-52.

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