Viral RNA Extraction Performance Data

RNAdvance Viral 与 RNAdvance Viral XP

RNAdvance Viral 试剂盒是基于 SPRI 顺磁珠技术构建的核糖核酸（RNA）分离化学试剂。经证实，SPRI 技术提取高纯度的 RNA，可用于高达 200µL 的唾液或拭子转运介质。该技术可在单个试管中或 96 孔板上进行，并可灵活地在各种液体处理平台上实现自动化操作。提取病毒 RNA 首先从各种样本中溶解病毒衣壳，包括唾液样本及鼻咽或口咽拭子样本。溶解后，磁珠捕获 RNA；然后进行洗涤，将包括扩增抑制剂在内的污染物冲洗干净。

• 产生适用于下游基因表达分析技术（如 qRT-PCR 与 NGS）的高质量 RNA
• 灵活的 SPRI 技术适用于液体处理设备处理大量样本。
• 检测限 (LoD) 显示为 1 拷贝数/μL

RNAdvance Viral 从唾液样本及鼻咽或口咽拭子样本进行提取的性能 - 分析性能

表 1. 从加有 1 和 2 拷贝数/µL 浓度 Exact Diagnostics SARS-CoV-2 标准品的转运介质中提取 RNA ，并一式四份运行。通过 qRT-PCR 评估 N1、N2 和 N3 基因的 Ct 值。含有 1 拷贝数/μL 和 2 拷贝数/μL 标准品的样本 Ct 值相当，且其 LoD 经确定为 1 拷贝数/μL。

图 1 从 5 个唾液样本和 5 个加有 1 拷贝数/μL SARS-CoV-2 分离株的 Healthlink UTM 收集管中提取 RNA，一式三份。通过 qRT-PCR 评估 N1、N2 和 RP（未显示）基因的 Ct 值。与 UTM 样本相比，唾液样本的平均 Ct 值较低（1～2），变异性较小，N1 和 N2 的 SD 值分别为 0.85 和 1.78。

转运介质样本的 RNAdvance Viral XP Extraction - 分析性能

*因无法测出，故平均 Ct 值未算出。
表 2. 从 SeraCare 阳性对照品（AccuPlex™ SARS-CoV-2 参比品试剂盒）中提取浓度为 0.3、1 和 3 拷贝数/μL 的 RNA，一式三份使用 RT-PCR 进行扩增。所有浓度高于 1 拷贝数/μL 的预设阳性样本均呈阳性，证实 LoD 为 1 拷贝数/μL。

RNAdvance Viral 试剂盒为下游 RT-PCR 工作流程提供稳定的工作性能。

图 2 （如左）使用 RNAdvance Viral XP 和 Competitor Column Based 提取试剂盒从 3 个已知阳性和 3 个已知阴性的 SARS-CoV-2 样本中提取 RNA。将 N1、N2 和 RP 基因的 RT-PCR Ct 值取平均值。误差条代表样本 Ct 值的标准差。（如右）使用 RNAdvance Viral 或竞品磁珠试剂盒手动提取 RNA。使用 SARS-CoV-2 N1、N2、N3 和 RP 基因的靶向引物集，通过 qRT-PCR 测定 Ct 值，结果显示其 Ct 值相当。在 0.2 拷贝数/μL时 ，两试剂盒均显示 Ct 值未确定，表明 LoD 为 0.2-2 拷贝数/μL。

RNAdvance Viral 可视化工作流程

1. LBF 和蛋白激酶 K 中的溶解组织
2. 将 RNA 与磁珠结合
3. 将磁珠与污染物分离
4. 使用 WBE 清洗磁珠
5. 使用 70% EtOH 清洗磁珠
6. 从磁珠中洗脱 RNA
7. 转移至另一个细胞培养板上

中位组织培养感染剂量 (TCID50) 研究证实溶解 (LBF) SARS-CoV-2 失活。

将 SARS-CoV-2 病毒与 LBF 混合，在室温下培养 20 分钟、60 分钟或 60oC 下培养 20 分钟。病毒-LBF 混合物经过过滤和离心，用 PBS 置换 LBF，以避免细胞毒性反应。将该混合物稀释 10 倍后接种细胞。表 3 中对 TCID50/mL 进行了计算，结果说明 LBF 可有效灭活 SARS-CoV-2 病毒。

表 3. TCID50 检测数据。在 10-2 稀释度（相当于 3.16×102TCID50/ml）下，无证据显示存在由病毒诱导的细胞病变效应 (CPE)。60oC 下将病毒样本加热灭活 20 分钟，所得结果相同。

为进一步确认病毒已灭活，使用 SARS-CoV-2/LBF 溶解混合物接种细胞。培养 5 天后，使用上清液接种初始细胞并计算 TCID50 (10 TCID50/mL)。结果表明，在室温下使用 LBF 溶解 20 分钟后，病毒活性降低了 7,940 倍以上，即 >99.987％ 的病毒被有效灭活。

RNAdvance Viral XP 可视化工作流程

1. 溶解 LBF 中的溶解样本
2. 将 RNA 与磁珠结合
3. 将磁珠与污染物分离
4. 使用 70% EtOH 清洗磁珠
5. 从磁珠中洗脱 RNA
6. 转移至另一个细胞培养板上

可根据样本批量大小与总体检测需求，通过手动或自动化工作流程高效地完成 RNA 提取操作。

表 4. 估计人工操作时间和总时间（小时），需执行 24、96 和 192 次 RNAdvance Viral RNA 提取。该方法可由人工操作或在液体处理系统上自动化操作。本表数据来自 Biomek i5 核酸溶液。NR=不推荐

产品信息：病毒 RNA 提取试剂盒

用于学术研究。

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