RNAdvance Cell v2 Performance and Data

从培养的真核细胞中提取并纯化总 RNA

RNAdvance Cell v2 试剂盒是基于 SPRI 顺磁珠技术的核糖核酸 （RNA） 提取试剂套件。它能够从细胞系中纯化高质量的 RNA。可以使用 2 mL 管或 96 孔板手动操作，或在贝克曼库尔特 Biomek 液体处理工作站进行 96 孔板自动化操作。使用 RNAdvance Cell v2 试剂盒提取的总 RNA 无 gDNA 和其他 PCR 抑制剂残留。

  • 有效去除基因组 DNA 和其他杂质
  • 从培养细胞中提取和纯化高质量总 RNA 以满足基因表达检测需求

 

通过 RNAdvance Cell v2 试剂盒高回收 RNA

采用 RNAdvance Cell v2 试剂盒和其他供应商试剂盒从 MRC-5 细胞提取 RNA。在图 1（下图）中，使用 Nanodrop（Thermo Fisher Scientific）对样本进行定量，结果表明，采用 RNAdvance Cell v2试剂盒，比其他三个供应商竞争试剂盒，可回收更多的RNA。在图 2（下图）中，使用 Nanodrop（Thermo Fisher Scientific）评估样品的纯度。对于 MRC-5 细胞，RNAdvance Cell v2 试剂盒以A260/280 的比值满足需求。 

Genomics RNAdvance Cells Yield and Purity

 

RNA 可从各种细胞系中提取

采用 RNAdvance Cell v2 试剂盒从 5x104 MRC-5、ACHN、HCT116 和 PANC1 细胞中提取 RNA，采用 NanoDrop（Thermo Fisher Scientific）进行定量和纯度评估。RNA 的产量取决于细胞系，但RNA 的质量在所有细胞系之间是稳定一致的，并且在合理的 A260/280 比值范围。

Cell Type Yield (µg) A260/A280
MRC-5 1.8 2.02
ACHN 0.5 1.98
HCT116 0.3 2.00
PANC1 1.0 1.93

 

从各种细胞系中分离出具有平均 RIN 分数 9.8 的高质量RNA

RNAdvance Cell v2 试剂盒可提取高质量 RNA。从 MRC-5、ACHN、HCT116 和 PANC1 细胞中提取的总 RNA，并和 universal human reference RNA (Agilent) 一起使用 Agilent RNA Screen Tape 检测，以评估质量。在图 3（下图）中，所有采用 RNAdvance Cell v2 试剂提取的样本的 RIN 值均 ≥ 9.4，表明已回收高质量且完整的 RNA。图4（下图）显示了电泳第一通道对应的 MRC-5 细胞中提取的 RNA 峰图；如图示，18s 和 28s rRNA 峰值显著。

Genomics RNAdvance Cells RIN Scores

 

有效去除基因组 DNA 和 PCR 抑制剂，实现在 qRT-PCR 应用中获取高质量数据和实验结果

Genomics RNAdvance Cells Amplification

Genomics RNAdvance Cells qRT PCR AmplifiabilityPCR 的能力通过 qRT-PCR 评估，采用引物（正向引物 5’-ggacttcgagatag-3’ 和反向引物 5’-agcactgttgcgtacag-3’）扩增 (β)-actin 基因（ActB）的第 4 个和第 5 个外显子，产生 327bp 扩增子。无 RT 对照显示可干扰下游 RNA 应用的 DNA 已被去除。在图 6（上图）中，使用 RNAdvance Cell v2 试剂盒从 4 个细胞系分离的 RNA 可扩增，表明该试剂盒去除了 PCR 抑制剂。在图 7（右图）中，使用 RNAdvance Cell v2 试剂盒和 3 个其他竞争供应商试剂盒从 ACHN 细胞中提取的 RNA，应用于 qRT-PCR（添加和不添加逆转录酶）。RNAdvance Cell v2 试剂盒和竞争供应商 A 和 B 的试剂盒已有效去除大部分 DNA，但供应商 C 的试剂盒在有逆转录酶和无逆转录酶的情况下仍旧具有同等的扩增效力，表明样本存在 DNA 污染物。

 

 

工作流程视图

Genomics RNAdvance Cell v2 Workflow

  1. 在裂解缓冲液和蛋白酶K中裂解细胞
  2. 将 RNA 与磁珠结合
  3. 将磁珠与杂质分离
  4. 用洗涤缓冲液和 70% 乙醇清洗磁珠，去除杂质
  5. 使用 DNase I 处理样品
  6. 用洗涤缓冲液将 RNA 重新结合到磁珠中
  7. 用 70% 乙醇清洗磁珠，去除杂质
  8. 从磁珠中洗脱 RNA
  9. 转移到新的孔板

 

与柱提法的试剂盒相比，采用Genomics RNAdvance Cells试剂盒在实验中可通过更少的移液器操作从样品中提取RNA

Genomics RNAdvance Cells Total Time and Pipette Mixing

图 8（上图）表示使用 RNAdvance Cell v2 试剂盒或基于柱的供应商试剂盒提取 1 至 96 个样本的 RNA 的总耗时。从 30 个样本中提取细胞内的 RNA 的总耗时在采用 RNAdvance Cell v2 试剂盒的情况下更短。在图 9（上图）中，处理 1、8、24、48 和 96 个样本时移液器操作的总次数（包括加样、混样和丢弃吸头等）。与柱提法的竞争供应商试剂盒相比，采用多通道移液器大大减少了需执行移液器操作的步骤。

 

根据批次大小或整体实验通量所涉及的手动或自动化方法的应用

预估用于 8、24、48 和 96 个样本的 RNA 提取所涉及的动手时间和总时间（按小时）。该方法可以在 Biomek i7  Hybrid 自动化工作站上手动或自动执行。显示手动和自动化之间的耗时差异（NR指“不推荐”）。

RNAdvance Cell v2 Manual Automated
Batch Size 8 Hands-on-Time 0.25 0.25
Total Time 1.15 2.43
24 Hands-on-Time 0.25 0.25
Total Time 1.30 2.50
48 Hands-on-Time NR 0.50
Total Time NR 2.86
96 Hands-on-Time NR 0.50
Total Time NR 3.08

 

用于从细胞内提取 RNA 的 RNAdvance Cell v2 试剂产品

RNAdvance Cell v2 试剂盒根据您的实验通量需求提供两种试剂盒规格。点击下方任意一个产品货号进行购买或询价。想要了解更多信息，请浏览我们关于 RNAdvance Cell v2 试剂盒用于细胞 RNA 提取的相关网页。

PART # NAME PREPS
A47942 RNAdvance Cell v2 Kit  100
A47943 RNAdvance Cell v2 Kit  960

 

 

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