GenFind V3 Performance and Data
从血液和血清中分离的基因组 DNA
GenFind V3 试剂盒是一款基于 SPRI 顺磁磁珠技术的基因组 DNA(gDNA)提取试剂盒。可从含抗凝剂(如 EDTA、枸橼酸盐或肝素)的新鲜或冷冻血液中提取得到可用于 PCR 的 gDNA。该方法既适用于 2mL 离心管或 96 孔板进行手工操作,也适用于贝克曼库尔特 Biomek 移液工作站进行自动化操作。相较于其他供应商的血液 gDNA 提取试剂盒产品, GenFind V3 试剂盒具有始终如一的提取性能。
- 所提取 gDNA 具有高质量和高纯度
- 无任何抗凝剂残留,对 PCR 和其他下游反应无抑制
- 处理高达 400µL 的新鲜或冷冻血液
gDNA 竞争性的回收率和纯度
使用 GenFind V3 试剂盒和其他供应商的试剂盒从 200 µL 新鲜或冷冻血样中提取 gDNA,血样分别含有肝素、EDTA 和枸橼酸盐抗凝剂。(图1) 使用 Quant-iT DNA 检测试剂盒、Picogreen 和NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)对 gDNA 产量进行定量分析。在含有 EDTA 的样本中,GenFind V3 试剂盒提取 gDNA 产量高于其他供应商试剂盒,在含有肝素和枸橼酸盐的样本中 GenFind V3 试剂盒提取 gDNA 的产量也具有竞争优势。(图2)使用 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)测定样品纯度。无论是新鲜还是冷冻血样,GenFind V3 试剂盒所提取的 gDNA 均具有理想的A260/280 比值。
Figure 1
Figure 2
采用 GenFind V3试剂盒提取高纯度的 gDNA
使用 GenFind V3 试剂盒、GenFind V2 试剂盒和三种其他供应商的试剂盒从 200 µL 新鲜或冷冻血液中提取 gDNA,所用血液分别含有抗凝剂肝素、EDTA 和枸橼酸盐。使用 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)测定 gDNA 纯度。无论在何种抗凝剂存在条件下,GenFind V3 试剂盒所提取 gDNA 的纯度均高于 GenFind V2 试剂盒和其他供应商的试剂盒。
Figure 3
产量随血液用量增大而提高
增加血样用量可以提高总产量且不影响纯度。使用 GenFind V3 从 400 µL 新鲜血液中提取 gDNA,所用血液含有抗凝剂 EDTA。使用 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)测定 gDNA 纯度和产量。
Figure 4
Figure 5
无 PCR 和下游应用抑制剂残留
通过 qPCR 进行 PCR 能力评价,该引物组(正向引物 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ 和反向引物 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´)扩增片段为跨越 β-肌动蛋白基因(ActB)的第 4 个和第 5 个外显子,片段大小为 327bp。(左图)从含有抗凝剂枸橼酸盐、EDTA 或肝素的血样中提取的 10ng gDNA 扩增曲线图;所有提取 gDNA 产物均可以进行 DNA 扩增,表明未残留任何抗凝剂类的 PCR 抑制剂。(右图)使用 GenFind V3 试剂盒和 GenFind V2 试剂盒从含有枸橼酸盐的血样中提取的 10ng gDNA 扩增曲线图。
Figure 6
Figure 7
对高分子量 DNA 具有高提取效率
GenFind V3 试剂盒提取高质量 gDNA。从含肝素、EDTA 和枸橼酸盐的血样中提取的 gDNA,在 Agilent Genomic DNA ScreenTape 上进行质量分析。(左图)GenFind V3 提取的所有 gDNA 其 DIN 值均 ≥ 9.0,表明提取的 gDNA 质量高且完整性好。使用供应商 A 试剂盒提取 gDNA 质量偏低,DIN 值为7.8。(右图)从含肝素和枸橼酸盐的血样中提取的 gDNA 样品峰图。
Figure 9
Figure 10
工作流程视图
1. 使用裂解液和蛋白酶 K 裂解全血或血清
2. 将 DNA 与磁珠结合
3. 将磁珠与杂质分离
4. 使用清洗缓冲液 1 清洗磁珠,以去除杂质
5. 使用清洗缓冲液 2 清洗磁珠,以去除杂质
6. 将 DNA 从磁珠上洗脱下来
7. 转移到新板存放
更少的移液器操作,减少手动操作时间
图 11 表示使用 GenFind V3 试剂盒或基于列操作的供应商 1 到 96 个样本提取 gDNA 的时间。GenFind V3 试剂盒可实现更短的手动操作时间完成 DNA 提取,即使在 10 个样本的情况下。在图 12 显示 1、8、24、48 和 96 个样本所需的移液操作总数。移液器操作包括加入样品、混合样品和丢弃上清液。使用多通道移液器,与基于列的供应商相比,在 24 个或更多样品情况下需要执行的移液器操作更少。
Figure 11
Figure 12
从血液中分离DNA的试剂盒
GenFind V3 试剂盒可根据您的实验通量需求提供 2 种试剂盒规格。请联系您当地的销售代表或访问我们的产品页面,请求报价。
PART # | NAME | PREPS |
---|---|---|
C34880 | GenFind V3 | 50 |
C34881 | GenFind V3 | 384 |
未用于或验证用于疾病或其他情况的诊断。
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